PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其確度高達(dá)納米級(jí)別。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有哪些問(wèn)題需要注意的。
一、PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源有哪些？
1.樣本間交叉感染：
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)導(dǎo)致外溢；不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌；不同樣本同時(shí)開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。
2.實(shí)驗(yàn)試劑污染：
主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。加樣過(guò)程中，因?yàn)镻CR試劑對(duì)溫度十分敏感，需要通過(guò)冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃，但這個(gè)過(guò)程也充滿污染風(fēng)險(xiǎn)。
3.擴(kuò)增產(chǎn)物污染：
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋，這是PCR反應(yīng)中最主要、最常見的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。
4.克隆質(zhì)粒污染：
作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室污染應(yīng)急處理方法
1、若核酸樣本溢出：
立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑，約30分鐘后，清除污染物品，再用次氯酸消毒劑擦拭，并用75%酒精噴灑，移動(dòng)紫外車定點(diǎn)照射1小時(shí)。
2.其他不明情況污染：
1、暫停所有實(shí)驗(yàn)操作；
2、清理實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有物品，尋找污染來(lái)源；
3、加大實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)；
4、對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有表面（臺(tái)面、地面及墻面） 進(jìn)行消毒；
5、75%酒精空中噴霧；
6、開啟紫外消毒裝置，延長(zhǎng)紫外照射時(shí)間（4小時(shí)以上）；
7、以上措施每日進(jìn)行，直至污染消除；用新試劑及確認(rèn)無(wú)污染的器材進(jìn)行原污染項(xiàng)目的試劑空白檢測(cè)，連續(xù)3次均陰性后方可進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。
負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室，是檢測(cè)病毒樣本的最基本條件。所謂負(fù)壓，就是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)氣壓比實(shí)驗(yàn)室外環(huán)境的正常氣壓要低，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外產(chǎn)生一定的壓力差，從而控制氣體流動(dòng)的方向，保證氣流從實(shí)驗(yàn)室外流向?qū)嶒?yàn)室內(nèi)，負(fù)壓能確保室內(nèi)空氣不會(huì)泄漏出去造成污染，可以有效的保護(hù)環(huán)境。
